gb Basic Reverse Transcription Kit to zestaw firmy Generi Biotech przeznaczony do odwrotnej transkrypcji RNA do cDNA z wykorzystaniem enzymu MMLV reverse transcriptase. Enzym ten przekształca RNA w komplementarne DNA, które może być następnie analizowane metodą PCR.
Zestaw umożliwia jednoetapową syntezę cDNA bez konieczności wcześniejszej denaturacji RNA. Po zmieszaniu składnika A, czyli roztworu reakcyjnego, oraz składnika B, czyli enzymu, wystarczy dodać próbkę RNA.
gb Basic Reverse Transcription Kit służy do przygotowania cDNA z matrycy RNA przed dalszą analizą molekularną.
Zestaw może być wykorzystywany do:
- Odwrotnej transkrypcji RNA do cDNA
- Przygotowania materiału do klasycznej reakcji PCR
- Syntezy cDNA z RNA zawierającego ogon poli(A)
- Syntezy cDNA z RNA bez ogona poli(A), dzięki obecności zdegenerowanych heksamerów
- Rutynowych zastosowań biologii molekularnej w laboratorium badawczym
Zestaw zawiera wszystkie kluczowe komponenty potrzebne do przeprowadzenia reakcji odwrotnej transkrypcji:
- Bufor reakcyjny
- dNTP
- Startery heksamerowe
- Startery oligo(dT)VN
- Odwrotną transkryptazę MMLV
Odwrotna transkryptaza MMLV pochodzi z wirusa mysiej białaczki Moloneya. Enzym syntetyzuje cząsteczki cDNA o długości do 13 kilozasad w optymalnej temperaturze 42°C.
Produkt jest przygotowany w formie dwuskładnikowej. Po połączeniu komponentu A i komponentu B powstaje 2× stężona mieszanina reakcyjna, wystarczająca na 20 reakcji odwrotnej transkrypcji.
| Cecha | Specyfikacja |
|---|
| Typ produktu | Zestaw do odwrotnej transkrypcji |
| Zastosowanie | Synteza cDNA z RNA |
| Enzym | MMLV reverse transcriptase |
| Format produktu | Dwuskładnikowy: komponent A + komponent B |
| Liczba reakcji | 20 reakcji |
| Objętość reakcji | 20 µl |
| Wejściowa ilość RNA | 100–1000 ng |
| Optymalna temperatura enzymu | 42°C |
| Startery | Hexamers, oligo(dT)VN |
| Denaturacja RNA przed reakcją | Nie jest wymagana |
Transkrypcja RNA do cDNA odbywa się w jednym kroku, bez konieczności wcześniejszej denaturacji próbki RNA.
Po zmieszaniu komponentu A i komponentu B użytkownik dodaje jedynie próbkę RNA, co upraszcza przygotowanie reakcji i ogranicza liczbę etapów manualnych.
Obecność starterów oligo(dT)VN oraz zdegenerowanych heksamerów pozwala na pracę zarówno z RNA zawierającym ogon poli(A), jak i z RNA bez poli(A).
Uzyskane cDNA może być bezpośrednio wykorzystywane jako materiał do dalszych analiz metodą PCR.
Zestaw zawiera 2× stężoną mieszaninę wystarczającą na 20 reakcji, co sprawdza się w podstawowych zastosowaniach biologii molekularnej.
