gb Elite Reverse Transcription Kit to zestaw firmy Generi Biotech przeznaczony do odwrotnej transkrypcji RNA do cDNA z wykorzystaniem enzymu MMLV reverse transcriptase. Enzym przekształca RNA w komplementarne DNA, które może być następnie analizowane metodą PCR.
Wersja Elite została opracowana z myślą o wyższej wydajności reakcji, większej czułości oraz lepszej odporności na RNazy i inhibitory. Zestaw umożliwia jednoetapową syntezę cDNA bez konieczności wcześniejszej denaturacji RNA — po zmieszaniu komponentu A i komponentu B wystarczy dodać próbkę RNA.
gb Elite Reverse Transcription Kit służy do przygotowania cDNA z matrycy RNA przed dalszą analizą molekularną.
Zestaw może być wykorzystywany do:
- Odwrotnej transkrypcji RNA do cDNA
- Przygotowania materiału do reakcji PCR
- Syntezy cDNA z RNA zawierającego ogon poli(A)
- Syntezy cDNA z RNA bez ogona poli(A), dzięki obecności zdegenerowanych heksamerów
- Analiz wymagających zwiększonej czułości i odporności na inhibitory
Zestaw zawiera komponenty potrzebne do przeprowadzenia reakcji odwrotnej transkrypcji:
- Bufor reakcyjny
- dNTP
- Startery heksamerowe
- Startery oligo(dT)VN
- Inhibitor RNazy
- Odwrotną transkryptazę MMLV
Odwrotna transkryptaza MMLV pochodzi z wirusa mysiej białaczki Moloneya. Enzym syntetyzuje cząsteczki cDNA o długości do 13 kilozasad w optymalnej temperaturze 42°C.
Produkt jest przygotowany w formie dwuskładnikowej. Po połączeniu komponentu A, czyli roztworu reakcyjnego, oraz komponentu B, czyli enzymu, powstaje 2× stężona mieszanina reakcyjna wystarczająca na 20 reakcji odwrotnej transkrypcji.
| Cecha | Specyfikacja |
|---|
| Typ produktu | Zestaw do odwrotnej transkrypcji |
| Zastosowanie | Synteza cDNA z RNA |
| Enzym | MMLV reverse transcriptase |
| Format produktu | Dwuskładnikowy: komponent A + komponent B |
| Liczba reakcji | 20 reakcji |
| Wejściowa ilość RNA | 100–1000 ng |
| Optymalna temperatura enzymu | 42°C |
| Startery | Hexamers, oligo(dT)VN |
| Dodatkowy składnik | Inhibitor RNazy |
| Denaturacja RNA przed reakcją | Nie jest wymagana |
Wersja Elite została opracowana z myślą o zwiększonej czułości i większej odporności na RNazy oraz inhibitory, co wspiera uzyskiwanie bardziej efektywnej syntezy cDNA.
Transkrypcja RNA do cDNA odbywa się w jednym kroku, bez konieczności wcześniejszej denaturacji próbki RNA.
Obecność inhibitora RNazy pomaga chronić RNA w trakcie przygotowania i prowadzenia reakcji odwrotnej transkrypcji.
Zestaw zawiera zarówno startery oligo(dT)VN, jak i zdegenerowane heksamery, dzięki czemu może być stosowany do RNA z ogonem poli(A) oraz RNA bez ogona poli(A).
Uzyskane cDNA może być wykorzystywane jako materiał wejściowy do dalszych analiz metodą PCR.
